饲料中沙门氏菌的检测方法国标是什么
来源：企来检 时间：2024-10-14 浏览：116
饲料中沙门氏菌的检测方法包括传统生理生化检测方法、酶联免疫分析法、免疫扩散法、免疫传感器法、免疫色谱技术、聚合酶链式反应技术、环介导等温扩增技术、核酸探针技术、基因芯片技术等。
饲料中沙门氏菌的检测方法
1、传统生理生化检测方法
传统生理生化检测方法包括样品的预增菌、选择性增菌、分离培养、生化试验和血清学鉴定等步骤。这种方法的准确性较高，依赖于细菌的生理和生化特性，但检测周期较长，需要4-7天。操作过程繁琐，且在一定程度上依赖于操作者的主观判断。
2、酶联免疫分析法
这是一种免疫学检测技术，通过利用抗原和抗体之间的特异性反应，结合酶的催化作用来检测特定的抗原。ELISA技术包括直接ELISA、间接ELISA、双抗体夹心ELISA及竞争ELISA等多种形式。它比传统检测方法的效率高，但同样需要长时间的增菌过程。在操作中，如果洗涤不彻底，可能会出现假阳性结果；洗涤过度则可能导致假阴性结果。
3、免疫扩散法
这种方法包括环状免疫单扩散法和双向扩散法，通过在琼脂中进行抗原和抗体的免疫沉淀反应，比较沉淀与抗原浓度的关系，从而定量检测样品中的抗原含量。如，加拿大农业部建立的改良免疫扩散法，在保持检测时间为2天的同时，通过添加高温选择性富集步骤来提高检测的准确性。
4、免疫传感器法
这种方法利用抗原和抗体的特异性结合反应，通过信号放大探针来检测沙门氏菌。免疫传感器法具有高灵敏度和高特异性，能够快速检测目标病原体。如，基于免疫磁珠的表面等离子共振免疫传感器，与肠炎沙门氏菌常规SPR传感器相比，其灵敏度提高了4个数量级。
5、免疫色谱技术
这是一种基于抗原和抗体特异性结合反应的技术。通过在柱填料中偶联抗原或抗体来制备亲和层析柱，样品通过层析柱后，与抗原或抗体特异性结合的免疫成分被分离纯化出来。免疫色谱技术具有高效、快速、安全的优点，并且选择性高，分离纯化效果显著。
6、聚合酶链式反应技术
这是一种体外基因扩增技术，能够快速、特异性强、敏感性高地检测目标基因。常用的PCR检测方法包括多重PCR法、荧光定量PCR法、免疫PCR法等。如，利用PCR技术检测沙门氏菌的研究中，有研究者根据沙门氏菌的invA基因设计引物，建立了一种灵敏度高于普通PCR的LAMP法，检测限为10 CFU/mL，具有快速、费用低、特异性好的优点。
7、环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术针对靶基因的6个区域设计4种特异性引物，在链置换DNA聚合酶的作用下，可以在60-65℃的温度范围内进行恒温扩增。这种方法不需要模板的热变性、温度循环，也不需要电泳及紫外观察等过程，具有操作简单、快速、特异性强的特点。LAMP技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，且不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。
8、核酸探针技术
这是一种基于核酸分子杂交原理的检测技术。核酸探针是一段具有特定序列的单链DNA或RNA分子，通过标记方式（如放射性同位素或非放射性物质）进行检测。核酸探针技术利用核酸探针与互补的核酸序列杂交形成双链，用于特定基因序列的检测。这种技术具有快速、特异、敏感的特点，可以用于检测病原体、遗传疾病等相关基因序列。探针的标记方式有放射性标记和非放射性标记，其中非放射性标记法包括酶标法和化学物标记法，如生物素、地高辛等。
9、基因芯片技术
基因芯片技术是一种微阵列技术，通过在固相表面（如膜、玻璃片等）上固定高密度排列的DNA片段，利用碱基互补杂交原理进行基因表达及监测等方面的研究。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定。基因芯片技术具有高通量、并行化的特点，可以同时检测成千上万个基因的表达情况，广泛应用于基因表达分析、疾病诊断、药物开发等领域。
10、生物传感器技术
生物传感器是由生物敏感元件与信号转换器构成的分析装置。生物敏感元件的作用是识别目标物质，可以是抗体、酶、核酸、细胞等生物物质，也可以是类似于生物物质的合成物质，如适配体、多肽、MIPs聚合物等。信号转换装置的作用是将生物敏感元件与目标分子之间的相互作用转换成不同的信号，如电信号、光信号等。生物传感器具有准确度高、检测速度快、操作简便的优点，可以用于检测化学物质、生物分子、环境污染物等多种目标物质。
11、纳米技术
纳米技术是研究和利用尺寸在纳米尺度内的材料和现象的科学。在检测领域，纳米技术可以利用纳米材料与电子材料、生物学结合起来，通过特定识别分子（如酶、抗体等）来分析待测样品，并产生特定信号。纳米技术具有大批量检测、方便快捷、灵敏度高的优点，可以用于制造高灵敏度的生物传感器、提高检测的准确性和速度。如，利用金属纳米材料和适配体结合，可以构建高灵敏度、高特异性的适配体传感器，用于检测病原菌等目标物质。
12、基于适配体的检测技术
适配体是一种新型识别分子，由单链寡核苷酸经折叠形成，长度为20~60个碱基，可通过指数富集的配体系统进化技术选择得到。适配体具有制备方便、可体外化学合成、成本低、稳定性好等优点，并且比抗体的制备周期短、特异性高。适配体可以与各种病原菌形成稳定的复合物，用于快速检测病原菌，具有巨大的潜力。
饲料中沙门氏菌检测的国家标准
1、GB/T 13091-2018《饲料中沙门氏菌的测定》
这是一项由国家市场监督管理总局和国家标准化管理委员会发布的国家标准，于2018年9月17日发布，并于2019年4月1日开始实施。该标准详细规定了饲料中沙门氏菌的检验方法，适用于饲料和饲料添加剂中沙门氏菌的检验。它提供了一套系统的检测流程，包括样品的预处理、增菌、分离培养、生化鉴定和血清学鉴定等步骤，以确保检测结果的准确性和可靠性。
2、GB/T 28642-2012《饲料中沙门氏菌的快速检测方法 聚合酶链式反应（PCR）法》
这是一项推荐性的国家标准，由国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会于2012年7月31日发布，并于2012年11月1日开始实施。该标准规定了饲料中沙门氏菌的快速检测的PCR方法，适用于饲料中沙门氏菌的定性筛选。PCR方法以其快速、灵敏和特异的特点，为饲料中沙门氏菌的检测提供了一种高效的技术手段。这项标准同样由全国饲料工业标准化技术委员会归口管理。
